Коронавірусна інфекція COVID-19: Роль реверс-транскрипційної полімеразної ланцюгової реакції (rRT-PCR) у якісному визначенні РНК SARS-CoV-2

Під час початку пандемії COVID-19 в 2019 році важливим інструментом для діагностики та моніторингу хворих стала реверс-транскрипційна полімеразна ланцюгова реакція (rRT-PCR). Цей метод дозволяє якісно визначити наявність РНК вірусу SARS-CoV-2 у біологічних зразках, таких як слина, носова рідина чи мазки з носа та горла. У цій статті ми розглянемо принципи роботи rRT-PCR, його значення у боротьбі з COVID-19 та методи забезпечення високої якості результатів.

Принцип роботи rRT-PCR

Реверс-транскрипційна полімеразна ланцюгова реакція (rRT-PCR) – це біологічний метод, який дозволяє аналізувати генетичний матеріал вірусу. Для діагностики COVID-19 використовуються зразки біологічного матеріалу від пацієнта, такі як мазки з носа та горла. Основні етапи роботи rRT-PCR включають:

Збір проб: Зразки біологічного матеріалу зі слизу носа або горла збираються за допомогою спеціальних апаратів.
Екстракція РНК: Генетичний матеріал вірусу, який міститься в цих зразках, виділяється та очищується.
Синтез комплементарної ДНК (cDNA): Очищена РНК перетворюється в ДНК за допомогою ферменту, що називається реверс-транскриптазою. Отримана cDNA є комлементарною до РНК вірусу.
Полімеразна ланцюгова реакція (PCR): Створена cDNA використовується для створення багатократних копій генетичного матеріалу вірусу. Це досягається за допомогою спеціальних ферментів, таких як ТАК-полімераза, та коротких олігонуклеотидних ланцюгів, які є комплементарними до РНК вірусу.
Детекція результатів: Після кількох циклів полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), кількість генетичного матеріалу вірусу стає досить великою для виявлення. Детектори здійснюють аналіз та визначають наявність ампліфікованого вірусного матеріалу.
Аналіз результатів: Результати аналізу визначають, чи є наявність РНК SARS-CoV-2 в біологічному зразку. Позитивний результат свідчить про інфекцію COVID-19, тоді як негативний результат вказує на відсутність вірусу.

Значення rRT-PCR у боротьбі з COVID-19

RRT-PCR став ключовим інструментом в діагностиці та моніторингу COVID-19 з двох основних причин:

Висока чутливість: RRT-PCR може визначити навіть дуже низькі рівні генетичного матеріалу вірусу. Це дозволяє виявляти інфекцію на ранніх стадіях, коли пацієнт може бути асимптомним, але все ще інфікованим.
Специфічність: Метод рRT-PCR специфічно розпізнає генетичний матеріал вірусу SARS-CoV-2, уникавши хибних позитивних результатів внаслідок схожості з іншими вірусами.

Якість результатів rRT-PCR

Забезпечення високої якості результатів rRT-PCR вкрай важливе для ефективної боротьби з COVID-19. Декілька ключових аспектів, які впливають на якість результатів, включають:

Збір і зберігання проб: Зразки повинні бути зібрані і збережені правильно, щоб уникнути забруднення або розпаду РНК вірусу.
Якість реактивів: Використовуйте високоякісні реактиви та контролі, щоб уникнути помилкових результатів.
Стандартизація та контроль якості: Регулярна перевірка та калібрування обладнання, а також використання позитивних та негативних контролів, допомагають забезпечити точність результатів.
Експертна оцінка: Результати rRT-PCR повинні бути інтерпретовані ветеринарним лікарем або молекулярним біологом, які мають досвід у діагностиці COVID-19.

Висновок: RRT-PCR є незамінним інструментом для діагностики та моніторингу COVID-19. Використовуючи його в поєднанні з іншими методами, ми можемо контролювати поширення вірусу та забезпечити належне лікування та ізоляцію інфікованих осіб, сприяючи таким чином здоров’ю громадськості. Дотримання вищезазначених правил та стандартів гарантує надійні результати rRT-PCR та ефективну боротьбу з пандемією COVID-19.